HOMOGENIZÁCIA. (Separačné metódy biochémie)
22.06.2012 16:08
HOMOGENIZÁCIA.
- dezintegrácia biologického materiálu, rozrušenie tkanivovej alebo bunkovej
štruktúry
- príprava homogénnej zmesi z tkanív a buniek
- homogenizačné médium má zaručiť maximálnu biochemickú a morfologickú
stabilitu bunkových organel alebo biomolekúl
Spôsoby homogenizácie:
1. rozotrenie buniek s tvrdými, abrazívnymi materiálmi (morský piesok)
v trecej miske, v mixéri alebo v Potterovom homogenizátore
Nevýhoda: porušenie väčších bunkových membrán, vznikajúce teplo denaturuje
citlivé enzýmy
2. ultrazvuk (ultrazvukový generátor) dezintegruje celé bunky aj bunkové membrány
Nevýhoda: lokálne prehriatie a prudké premiešanie zmesi
väčšinou pre malé objemy vzoriek
3. zmrazovanie a rozmrazovanie
- bunky v tepelne odolnom skle sa ponoria do zmesi tuhého CO2 a acetónu al.
etanolu (-70oC) na čas 5 min., potom sa ponoria do vodného kúpeľa o teplote 20 - 30oC
- objem vzorky 1 - 2ml pre dôkladné zmrazenie a rozmrazenie
Nevýhoda: pri pomalom postupe denaturácia bielkovinových štruktúr
4. enzymatické rozrušenie bunkových stien - celulázy, lyzozým