HOMOGENIZÁCIA. (Separačné metódy biochémie)

22.06.2012 16:08

 

HOMOGENIZÁCIA.

- dezintegrácia biologického materiálu, rozrušenie  tkanivovej alebo bunkovej

  štruktúry 

- príprava homogénnej zmesi z tkanív a buniek

- homogenizačné médium má zaručiť maximálnu biochemickú a morfologickú

   stabilitu bunkových organel alebo biomolekúl

 

Spôsoby homogenizácie:

1. rozotrenie buniek s tvrdými, abrazívnymi materiálmi (morský  piesok)

    v trecej miske, v  mixéri alebo v Potterovom homogenizátore

    Nevýhoda: porušenie väčších bunkových membrán, vznikajúce teplo denaturuje

                      citlivé enzýmy

 

2.  ultrazvuk (ultrazvukový generátor) dezintegruje celé bunky aj bunkové membrány

    Nevýhoda: lokálne prehriatie a prudké premiešanie zmesi

                      väčšinou pre malé objemy vzoriek

 

3. zmrazovanie a rozmrazovanie

    - bunky v tepelne odolnom skle sa ponoria do zmesi tuhého CO2 a acetónu al.

     etanolu (-70oC) na čas 5 min., potom  sa ponoria do vodného kúpeľa o teplote 20 - 30oC

   - objem vzorky 1 - 2ml  pre dôkladné zmrazenie a rozmrazenie

    Nevýhoda: pri pomalom postupe denaturácia bielkovinových štruktúr

 

4. enzymatické rozrušenie bunkových stien - celulázy, lyzozým