Metodika papierovej chromatografie:
22.06.2012 16:19
Metodika papierovej chromatografie:
Ø výber chromatografického papiera (rôzna hustota, poréznosť, hrúbka)
Ø úprava vzorky - limitujúcim faktorom je objem vzorky (do 50ml), preto musí byť vzorka zakoncentrovaná a bez rušivých prímesí (soli, lipidy...)
Ø aplikácia vzorky na papier - označené miesto "štart", pri opakovanom nanášaní vzorky sa papier musí vysušiť, max. plocha vzorky 5mm2
preparatívna chromatografia: väčšie objemy, rovnomerná aplikácia
Ø vyvíjacia sústava - tzv. mixotropný rad rozpúšťadiel, resp. eluotropný rad rozpúšťadiel od vody (najpolárnejšia) po parafínový olej (nepolárny)
- pohyb látok musí byť 0< Rf >1 teda Rf ¹ 0 ani Rf ¹ 1
- škvrny musia mať ohraničený tvar, nie rozmazané v smere pohybu mobilnej
fázy
- chemické podmienky = vyvíjacia sústava
- fyzikálne podmienky = teplota, tlak pár nad mobilnou fázou, nasýtenie papiera
stacionárnou fázou chromatografická komora
- vyvíjanie zostupné alebo vzostupné
Ø sušenie a detekcia - po skončení vyvíjania sa papier musí vysušiť a až potom
sa detekujú rozdelené látky
Detekcia: podľa chem. povahy látok (zafarbením, UV-svetlom, rádioaktívne...)
Ø vyhodnotenie: vzdialenosť škvrny od štartu
plocha škvrny (je priamoúmerná log hmotnosti látky)
intenzita zafarbenia škvrny (farebná škála + sýtosť zafarbenia)
rádioaktivita škvrny
elúcia škvŕn (vystrihnúť a rozpustiť)