Metodika papierovej chromatografie:

22.06.2012 16:19

 

Metodika papierovej chromatografie:

Ø      výber chromatografického papiera (rôzna hustota, poréznosť, hrúbka)

Ø      úprava vzorky - limitujúcim faktorom je objem vzorky (do 50ml), preto musí byť  vzorka zakoncentrovaná a bez rušivých prímesí (soli, lipidy...)

Ø      aplikácia vzorky na papier - označené miesto "štart", pri opakovanom nanášaní vzorky  sa papier musí vysušiť, max. plocha vzorky 5mm2

preparatívna chromatografia: väčšie objemy, rovnomerná aplikácia

Ø      vyvíjacia sústava - tzv. mixotropný rad rozpúšťadiel, resp. eluotropný rad rozpúšťadiel od vody (najpolárnejšia)  po parafínový olej (nepolárny)

-  pohyb látok musí byť   0< Rf >1     teda Rf ¹ 0  ani  Rf ¹ 1

      - škvrny musia mať ohraničený tvar, nie rozmazané v smere pohybu mobilnej

        fázy

     - chemické podmienky = vyvíjacia sústava

     - fyzikálne podmienky = teplota, tlak pár nad mobilnou fázou, nasýtenie papiera          

                                      stacionárnou fázou          chromatografická komora

- vyvíjanie zostupné alebo vzostupné

Ø      sušenie a detekcia - po skončení vyvíjania sa papier musí vysušiť a až potom

                                      sa detekujú rozdelené látky

Detekcia: podľa chem. povahy látok (zafarbením, UV-svetlom,  rádioaktívne...)

Ø      vyhodnotenie: vzdialenosť škvrny od štartu

                             plocha škvrny (je priamoúmerná log hmotnosti látky)

                             intenzita zafarbenia škvrny (farebná škála + sýtosť zafarbenia)   

                             rádioaktivita škvrny

                             elúcia škvŕn (vystrihnúť a rozpustiť)