ZRÁŽACIE  METÓDY.

- čiastočné prečistenie a zahustenie roztokov makromolekúl, najmä bielkovín

           neutrálne anorganické soli

                organické rozpúšťadlá

                   zmena pH

Princíp: zmenšovaním solvatačného obalu biomolekúl (vrstvy molekúl vody)

               sa  znižuje rozpustnosť  látok

·        Zrážanie neutrálnymi anorganickými soľami = vysoľovanie, precipitácia.

- pri vysoľovacom efekte je dôležitejší anión  soli

Pr. síran amónny, síran sodný, síran horečnatý, chlorid sodný

Postup:

                                                             nasýtený roztok soli

- k roztoku biomolekúl sa pridáva

                                                                  soľ, rozotrená na jemný prášok

soľ sa pridáva sa do tzv. % nasýtenia   - množstvo soli, pri ktorom sa daná

                                                                  biomolekula vyzráža závisí od jej

                                                                  solvatačného obalu (individuálne)

- pracovná teplota 20^oC (niekedy 5^oC), precipitácia pomalá a za stáleho miešania,

 Výhody: nízka denaturácia bielkovín

               práca pri laborat. teplote

               nenastáva zmena pH

Nevýhody: potreba odstrániť soľ (dialýza, gélová filtrácia)

·        Zrážanie organickými rozpúšťadlami.

- zrážanie bielkovín a polysacharidov pomocou organických rozpúšťadiel

   miešateľných s vodou

- metanol, etanol, acetón (menej polárne rozpúšťadlá sú účinnejšie)

- rozpúšťadlo sa pridáva v objeme 3 - 4 -krát väčšom, ako je objem vzorky

Nevýhody: prchavosť rozpúšťadla = práca pri 0-5^oC

                                                          rozpúšťadlo schladené na -15 až -18^oC

                  veľké objemy  vzorka + rozpúšťadlo

Výhody: rozpúšťadlo nie je potrebné zo vzorky odstraňovať

              regenerácia rozpúšťadiel destiláciou

·        Zrážanie zmenou pH.

 - bielkovina má najmenšiu rozpustnosť v izoelektrickom bode