Molekulová absorpčná spektroskopia: (Optické metódy v biochémií)
22.06.2012 19:24
Molekulová absorpčná spektroskopia:
1. Spektrofotometria vo viditeľnej a v ultrafialovej oblasti.
Absorpcia žiarenia molekulami vzorky = meranie intenzity monochromatického žiarenia pred a po prechode vzorkou.
Praktické využitie žiarenia :
Spektrálna oblasť Vlnová dĺžka
UV-ďaleká 100 - 200 nm
UV - blízka 200 - 400 nm
VID 400 - 750 nm
Pre kvantitatívne vyhodnotenie sa používa meranie transmitancie (T)
alebo meranie absorbancie (A).
Absorbancia je logaritmus pomeru svetelnej intenzity žiarenia vstupujúceho
do vzorky a svetelnej intenzity žiarenia vystupujúceho zo vzorky
I0
A = log
I
Transmitancia je pomer svetelnej intenzity žiarenia vystupujúceho zo vzorky
a svetelnej intenzity žiarenia vstupujúceho do vzorky
I
T =
Io
Prakticky: { T }% = T.100
Pre dokonale priepustné látky (neabsorbujú žiarenie) je A=0 a T=1, resp. T=100%.
Látky, ktoré neprepúšťajú žiarenie majú A=¥ a T=0%.
Závislosť absorbancie alebo transmitancie od vlnovej dĺžky je absorpčné spektrum látky.
Vzťah medzi absorbanciou žiarenia a koncentráciou látky vyjadruje
Lambertov - Beerov zákon:
Al = el dc e - molárny absorpčný koeficient [mol-1.cm-1]
d - hrúbka prostredia = dĺžka optickej dráhy
c - molárna koncentrácia