Molekulová absorpčná spektroskopia: (Optické metódy v biochémií)

22.06.2012 19:24

 

 Molekulová absorpčná spektroskopia:

1. Spektrofotometria vo viditeľnej a v ultrafialovej oblasti.

Absorpcia žiarenia molekulami vzorky = meranie intenzity monochromatického  žiarenia pred a po prechode vzorkou.

 

Praktické využitie žiarenia :

Spektrálna oblasť             Vlnová dĺžka

UV-ďaleká                        100 - 200 nm

UV - blízka                        200 - 400 nm

VID                                    400 - 750 nm

 

 

Pre kvantitatívne vyhodnotenie sa používa  meranie transmitancie (T)

                                                           alebo meranie absorbancie (A).

 

Absorbancia je logaritmus pomeru svetelnej intenzity žiarenia vstupujúceho

                     do vzorky  a svetelnej intenzity žiarenia vystupujúceho zo vzorky

                                                        I0

                                           A = log

                                                        I

 

Transmitancia je pomer svetelnej intenzity žiarenia vystupujúceho zo vzorky

                        a svetelnej  intenzity žiarenia vstupujúceho do vzorky

                                                   I

                                           T =                    

                                                   Io

 

Prakticky:  { T }% = T.100

 

Pre dokonale priepustné látky (neabsorbujú žiarenie) je A=0 a T=1, resp. T=100%.

Látky, ktoré neprepúšťajú žiarenie majú A=¥ a T=0%.

Závislosť absorbancie alebo transmitancie od vlnovej dĺžky je absorpčné spektrum látky.

Vzťah medzi absorbanciou žiarenia a koncentráciou látky vyjadruje

Lambertov - Beerov zákon:

                               Al = el dc          e - molárny absorpčný koeficient  [mol-1.cm-1]

                                                                               d - hrúbka prostredia = dĺžka optickej dráhy

                                                                  c - molárna koncentrácia