Spektrofotometria: (Optické metódy v biochémií)
22.06.2012 19:24
Spektrofotometria:
- meria sa intenzita zoslabeného monochromatického žiarenia po prechode vzorkou
Základné zariadenie:
zdroj žiarenia monochromátor vzorka detektor
pre UV: deutériová výbojka v kyvete z kremenného skla
pre VID: volfrámová lampa
halogénová lampa
optické hranoly a mriežky fotonásobič
Praktické využitie:
pre neznáme látky je potrebné zmerať celé absorpčné spektrum
jednorázové meranie absorbancie je vždy pri vlnovej dĺžke absorpčného maxima
z roztokov o známej koncentrácii sa pripravujú kalibračné grafy
referenčným roztokom (nastavenie prístroja, pozadie...) je vždy čisté rozpúšťadlo
Stanovenie koncentrácie bielkovín:
Metóda podľa Whitakera a Granuma: [A235 - A280] :2,51 . riedenie = mg/ml
Metóda podľa Laynea: 1,55.A280 - 0,76.A260 = mg/ml
Stanovenie pomocou kalibračných roztokov: podľa Lowryho alebo podľa Bradforda
Kolorimetria:
- porovnávanie intenzity zafarbenia farebných roztokov so štandardnými roztokmi
Platí Beerov zákon: c1.d1 = c2.d2 c1 - meraná koncentrácia látky
d1 - hrúbka vrstvy vzorky
c2 - koncentrácia štandardu
d2 - hrúbka vrstvy štandardu
Nepresná metóda, chyba pri stanovení ± 5 - 20%