Zariadenia pre gélovú filtráciu:
22.06.2012 16:21
Zariadenia pre gélovú filtráciu:
1. kolóna naplnená gélom - sklenená alebo plexisklová trubica
- naplnenie napučaným, odvzdušneným gélom
-ekvilibrácia gélu elučným roztokom
2. zariadenie pre dávkovanie elučného roztoku - presný prietok elučného roztoku
sa reguluje hydrostatickým tlakom alebo čerpadlom
3. detektor - meranie absorbancie v UV alebo vo VID oblasti, meranie rádioaktivity...
4. zberač frakcií - eluát sa zachytáva v určitých objemoch alebo po určitom čase
Sacharidové gély môžu byť kontaminované mikroorganizmami. Preto po delení kolóny dostatočne premyť elučným roztokom, vodou a aplikovať mikrobicídne látky
(0,02% azid sodný - pred ďalším použitím dôkladne vymyť.)
Uchovávanie gélov: vysušenie do 60oC alebo postupné pridávanie 100% etanolu a potom vysušenie.
Aplikácie:
Skupinová separácia látok - oddelenie skupín látok s veľmi rozdielnymi
relatívnymi molekulovými hmotnosťami.
Napr. odsolenie bielkovín.
Nosič: Sephadex G10, G25, G50.
Kolóna: 30x100 cm, objem vzorky 5 - 30% objemu náplne, prietok 10 ml/min.
Frakcionácia látok - oddelenie látok s podobnou relatívnou molekulovou
hmotnosťou na jednotlivé frakcie
Napr. oddelenie rôznych enzymaticky aktívnych bielkovín
Nosič: Sephadex G100, G200
Určenie relatívnych molekulových hmotností - využíva sa lineárna
závislosť medzi elučným objemom Ve a log Mr.
Pomocou štandardov.